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創(chuàng )傷弧菌探針?lè )晒舛縋CR檢測試劑盒

  • 更新時(shí)間:  2023-06-30
  • 產(chǎn)品型號:  50T
  • 簡(jiǎn)單描述
  • 創(chuàng )傷弧菌探針?lè )晒舛縋CR檢測試劑盒所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監測整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過(guò)標準曲線(xiàn)對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
詳細介紹

注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時(shí)間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動(dòng)力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。

產(chǎn)品名稱(chēng)

創(chuàng )傷弧菌探針?lè )晒舛縋CR檢測試劑盒

英文名稱(chēng)

Vibrio vulnificus

貨號

CP934875

儲存條件:

14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

探針?lè )ǎ?br />創(chuàng )傷弧菌探針?lè )晒舛縋CR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴增相關(guān)。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時(shí),熒光基團發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進(jìn)行延伸反應時(shí),聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切,使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著(zhù)擴增循環(huán)數的增加,釋放出來(lái)的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產(chǎn)物的數量呈正比關(guān)系。相對于染料法,Taqman探針?lè )ň哂懈叩奶禺愋院蜏蚀_性。
使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線(xiàn)(以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽(yáng)性對照。
1. 標記6個(gè)離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽(yáng)性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對照。
5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對照。
6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對照。
7. NC管中不加任何陽(yáng)性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做3次重復。PCR后得到每個(gè)陽(yáng)性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線(xiàn)。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

應用案例:
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽(yáng)性對照(以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對照,只提供可以直接使用的長(cháng)為 86bp 的 DN段作為陽(yáng)性對照。
2.標記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照。放冰上待用
8.重復上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應(20  μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9.在 PCR 管中加入下列成分。
以下是公司正在熱銷(xiāo)的產(chǎn)品:

NHEDC2  線(xiàn)粒體鈉/交換蛋白質(zhì)2抗體半固體營(yíng)養瓊脂

NHE1/APNH1  鈉通道蛋白抗體GN 增菌液

NGX6  鼻咽癌細胞相關(guān)基因6抗體SS 瓊脂

NGN3/Neurogenin 3  神經(jīng)元素3抗體SS 瓊脂平板

NGN1/Neurogenin 1  神經(jīng)元素1抗體克雙糖鐵瓊脂(KI)

NGF-β  神經(jīng)生長(cháng)因子β抗體克雙糖鐵瓊脂(KI)斜面(限供汽運)

NGFR/p75NTR  神經(jīng)生長(cháng)因子受體抗體培養基

NGB/neuroglobin  腦紅蛋白/神經(jīng)紅蛋白/神經(jīng)球蛋白抗體尿素瓊脂基礎(pH7.2)

NGALR/Slc22A17  可溶性載質(zhì)轉運蛋白22A17抗體40%尿素溶液

NGAL/Lipocalin 2  脂質(zhì)運載蛋白抗體尿素瓊脂斜面(pH7.2)

NG2/CSPG4  黑色素瘤硫酸軟骨素蛋白多糖4抗體尿素瓊脂斜面(pH7.2)

NG2  硫酸軟骨素蛋白多糖4/黑色素瘤相關(guān)蛋白抗體苯氨酸培養基

NF-κB p105/p50(Phospho-Ser373)  酸化細胞核因子p50/k基因結合核因子抗體苯氨酸培養基

創(chuàng )傷弧菌探針?lè )晒舛縋CR檢測試劑盒NFX1  核轉錄因子X(jué)盒結合蛋白1抗體苯氨酸培養基

NF-M/Neurofilament M  中分子量神經(jīng)絲蛋白抗體10%三化鐵豬細小病PCR檢測試盒白頭翁皂苷D

豬細小病實(shí)時(shí)熒光PCR檢測試盒白鮮

豬圓病PCR檢測試盒白楊素

豬圓病1型和2型雙重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測試盒白楊素-7-葡萄糖酸苷

豬圓病1型實(shí)時(shí)熒光PCR檢測試盒白芷屬腦

豬圓病2型實(shí)時(shí)熒光PCR檢測試盒百兩金素A

豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉、豬輪狀病三重實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測試盒百秋李醇

豬流行性腹瀉病RT-PCR檢測試盒百蕊草素I

豬流行性腹瀉病實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測試盒半邊旗4F

豬傳染性胃腸炎病實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測試盒半邊旗5F
熒光定量PCR檢測試劑盒


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